2023廣西南寧知識大全：單核細胞系誘導成巨噬細胞@網站小助手

【2023廣西南寧知識大全：單核細胞系誘導成巨噬細胞@網站小助手】：今天小視頻助手分享的內容是——人單核細胞白血病(THP-1)細胞培養攻略,巨噬細胞,來源于,,,，小視頻將詳細內容整理如下： 人單核細胞白血病(THP-1)細胞培養攻略

提示：

人單核細胞白血病(THP-1)細胞培養攻略

THP-1細胞系是1980年Tsuchiya等人建立的人單核細胞白血病細胞系。它來自一位急性單核細胞白血病患者的血液，有分化為多種巨噬細胞的能力，是各領域研究常用的細胞系之一。

THP-1是人外周血的單核細胞系，最初來源于急性單核細胞性白血病患者。屬于懸浮細胞，適合用于轉染或感染實驗。其表面抗原HLA型為：A2，A9，B5，DRw1，DRw2。



|  細胞復蘇

1. 預熱水浴鍋至37℃

2. 準備一個15mL離心管，加入2-3mL左右完全培養基待用

3. 將細胞從-80℃冰箱或液氮中取出后，放進一次性PE手套中，立即投入水浴鍋，迅速用力搖晃管子，使其1分鐘內融化

4. 酒精擦拭凍存管，進入生物安全柜，把融化的細胞懸液緩慢滴加到步驟2準備好的離心管中

5. 1200rpm（約250g）離心3分鐘

6. 同時準備1個新的T25培養瓶，加入5mL完全培養基

7. 去上清，新鮮培養基重懸細胞后滴加到步驟6的培養瓶里，放入培養箱

小貼士：THP-1細胞復蘇后通常需要3-5天恢復狀態，建議復蘇后48小時內不要進行操作。

| 細胞凍存

1. 預先配制好凍存液

【推薦海星 HyCyte™一步凍存液 (即用型、無血清、無需程序降溫)】

2. 細胞1200rpm（約250g）3分鐘離心后

3. 去上清，用配好的凍存液重懸細胞

4. 轉移入凍存管

5. 凍存管放進程序凍存盒

6. 凍存盒放進-80度冰箱過夜，再放液氮長期保存

小貼士：由于THP-1是懸浮細胞，更易受到凍存影響，建議加大凍存密度，大約200萬-300萬/mL為宜，以提高復蘇存活率。

| 培養條件

培養基：RPMI-1640+10%FBS+0.05 mM β-mercaptoethanol+1%P/S

推薦傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

培養條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

| 傳代操作

當細胞密度達到約8x10^5cells/ml左右時，即可進行傳代。由于是懸浮細胞，可直接將細胞吸出，離心之后傳代。傳代最少濃度不應少于1x10^5 cells/ml。

去掉培養皿中的培養基，加入PBS進行沖洗，并去上清;

加入胰酶進行潤洗，并去上清;

放入CO2培養箱消化2-4min;

加入完全培養基終止消化，并吹打均勻。

| 常見問題

1. 收貨時細胞出現偽足，或是碎片較多怎么辦？

受到運輸影響，懸浮細胞會短暫性出現形態改變的現象，如偽足等。通過傳代培養，1周左右可以恢復正常。一些細胞在運輸途中死亡而產生碎片，通過傳代離心可以去除（見上文傳代篇）。

2. 培養過程中細胞發生貼壁怎么辦？

少量細胞貼壁屬于正常情況，將細胞懸液轉移至新瓶中即可。當貼壁細胞的比例高于20%，說明細胞生長環境有異常，需排查培養箱設置、培養基成分，以及培養器皿是否異常。

3. 培養過程中細胞發生聚團怎么辦？

少量細胞聚團，呈葡萄串狀，屬于正常現象，特別是細胞密度較低時，易出現這種情況。更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團問題。不建議將聚團的細胞吹散，等待密度高時，會自己分散開。

4. 培養基里一定要加β-巰基乙醇嗎？

β-巰基乙醇是一種常用的培養補充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應激對THP-1細胞的影響。當細胞密度過大但需要維持時，可適當增加巰基乙醇的比例（不超過標準量的1.5倍）。

5. 鏡下觀察時，難以聚焦或估算密度怎么辦？

懸浮細胞會隨著液體流動，不容易聚焦，靜置5-10分鐘使細胞沉底，之后在輕輕放上顯微鏡觀察，將有助于聚焦和估算細胞密度。

| 注意事項

1. 細胞養不好，可能的原因有，THP-1細胞特別依賴細胞濃度，ATCC上10 5到106每ML，是一個很高的密度，細胞少了就不太容易養好。

2. 細胞株的來源很重要，如直接來源于ATCC（American Type Culture Collection 美國模式菌種保藏中心）生命力要強于國內細胞庫的。

3. 注意細胞的密度一定要高，介于5×10^5—— 10^6/mL之間，增值的快。細胞數量太少，不適合THP-1生長，一般狀態不好的THP-1在培養了3天后數量仍然不多，繼續培養一天或者兩天，培養基 嚴重泛黃，細胞數會增加。這一點不同于同是單核細胞系的U937細胞。

4. THP-1細胞適合在細胞Ph環境偏酸性環境生長，對培養基變化非常敏感，所以 盡量使用相同Ph的1640。

5. 傳代后切忌常移出培養箱觀察，否則會影響細胞生長，狀態變差，一般首先表現為細胞內顆粒變多。一般THP-1 生長相當快，對于狀態已經不好的情況，建議傳代后3～4天再觀察，一般4天時間培養基已明顯泛黃，細胞數量巨增;1)THP-1細胞喜歡酸性條件，你不要老是換培養基。越酸的條件，細胞密度越大，細胞就長得越好;2）不要頻繁換液，一般2-3次換液離心一次（只是補充培養基）3） 使用1640（ATCC推薦），注意加碳酸氫鈉2.5g就可以了，寧酸勿堿; 4）注意凍存的時候密度大些，推薦用血清凍存。

6. 復蘇比較慢，建議開始用小瓶，不要用一次性的。

巨噬細胞來源于是什么？

提示：

巨噬細胞來源于是什么？

巨噬細胞來源于單核細胞。 巨噬細胞（英語：Macrophages，縮寫為mø）是一種位于組織內的白血球，源自單核細胞，而單核細胞又來源于骨髓中的前體細胞。巨噬細胞和單核細胞皆為吞噬細胞，在脊椎動物體內參與非特異性防衛（先天性免疫）和特異性防衛（細胞免疫）。 它們的主要功能是以固定細胞或游離細胞的形式對細胞殘片及病原體進行噬菌作用（即吞噬以及消化），并激活淋巴球或其他免疫細胞，令其對病原體作出反應。 簡介 巨噬細胞（macrophage cell)也稱組織細胞（histocyte)，是由血液中的單核細胞穿出血管后分化而成的。單核細胞進入結締組織后，體積增大，內質網和線粒體增生，溶酶體增多，吞噬功能增強。巨噬細胞的壽命因所在組織器官而異，一般可存活數月或更長。 單核細胞向巨噬細胞分化的過程中還伴隨某些表型的改變，包括： ①細胞表面受體如補體iC3b和轉鐵蛋白的受體表達增加。 ②細胞內酶如α－氨基己糖苷酯酶（α－amino glycoside esterase)、肌酸激酶、組織谷氨酰胺轉移酶（tissue transglutaminase)和cAM依賴的蛋白激酶表達增強。 ③分泌過氧化氫和超氧離子的能力降低。同時，此過程還明顯受IFN-γ和激素的負調節。

巨噬細胞來源于什么？

提示：

巨噬細胞來源于什么？

巨噬細胞來源于：單核細胞，而單核細胞又來源于骨髓中的前體細胞。巨噬細胞和單核細胞皆為吞噬細胞，在脊椎動物體內參與非特異性防衛（先天性免疫）和特異性防衛（細胞免疫）。它們的主要功能是以固定細胞或游離細胞的形式對細胞殘片及病原體進行噬菌作用（即吞噬以及消化），并激活淋巴球或其他免疫細胞，令其對病原體作出反應。 巨噬細胞生命周期 當單核細胞經血管的內皮細胞層進入一已受損的組織時（這過程被稱為白血球外滲作用），它經過一連串轉變以成為巨噬細胞。單核細胞會因化學趨向性而被化學物質的刺激吸引至受損處，這些刺激包括受傷細胞、病原體、由肥大細胞和嗜堿性細胞所釋放的組織胺，以及由已于該處的巨噬細胞釋出的細胞因子。在某些地方，如睪丸，巨噬細胞已被證實會透過增殖以移殖于此。 以上內容參考：百度百科-巨噬細胞